胎牛血清的常规存储温度为-20℃，若需长期保存，建议使用-80℃。解冻时，不建议将血清直接放置于常温（25-37℃）下，这样容易形成絮状沉淀，可能会影响血清品质。推荐的解冻方式为：首先将血清从-20/-80℃转移至4℃，待完全化冻为液体后，再将其移至室温。在解冻过程中，应定期轻轻摇动，以均匀混合血清内成分与温度，从而减少沉淀的产生。

解冻后，可将血清分装至15mL或50mL的无菌离心管中进行冻存。根据使用频率，可在4℃保存一管已化冻分装的血清，以便于定期配制培养基。但请注意，4℃下保存时间不宜过长，最好在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不适合在37℃或室温下存放太久，以避免重要的细胞生长因子失活，从而影响细胞状态。

一般而言，血清的添加量不宜过多，常见添加比例为5%、10%或20%。大多数细胞的正常培养推荐使用10%的血清浓度，而部分原代细胞在提取时可使用20%血清。针对某一特定细胞类型适应的血清浓度，需根据细胞特性和实验目的进行探索。

此外，关于热灭活，一般采用56℃加热30分钟处理已解冻的血清，此步骤可去活化补体。而补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌的收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、增强吞噬作用及淋巴细胞和巨噬细胞的趋化与激活。尽管如此，常规细胞培养并不一定要求进行热灭活，对大多数细胞培养而言，这一步骤通常不是必需的。经过热灭活处理的血清对细胞生长的积极作用较小，反而可能因为高温处理导致血清质量下降，进而影响细胞生长速率及增加沉淀物的产生。

在细胞培养过程中，科研人员常常需要更换血清。若直接使用另一种血清配制的培养基培养细胞，可能会导致以往生长迅速的细胞突然生长缓慢甚至脱壁死亡。这通常是因为细胞已经适应了原有的培养环境，突然更换新的营养环境，即便是更优质的血清，也可能导致不适。为此，更换血清时建议遵循梯度替换的原则，以帮助细胞逐渐适应新的环境。首次使用新血清时，建议用原培养体系进行细胞复苏，待细胞状态恢复后再进行后续实验。测试时不建议直接100%替换为新血清，应按比例梯度替换，例如，首次替换时可按照新旧体系1:3、第二次1:1、第三次3:1，最终完成全换。

解冻后如发现少量乳白色絮状物或点状物，这些物质主要是由血清中的脂蛋白变性与纤维蛋白形成的，不会影响血清的整体质量。可通过400×g离心5分钟取上清，通常不会对细胞造成显著影响。一般情况下，厂家提供的血清为无菌状态，无需再行过滤。如发现血清中有悬浮物，可将其加入培养液中一起过滤，而不应直接过滤血清。

在细胞培养过程中，如发现黑点生成，首先应观察培养基是否混浊、黑点是否表现出不规则移动。如果是细胞受到污染，微生物会大量繁殖，导致培养基迅速变黄或混浊。污染可能来源于细菌或支原体等。如果在显微镜下观察细胞生长良好，且与出现黑点前无变化，则黑点的出现可能由以下几个因素导致：(1)细胞在生长过程中自然破碎后的细胞残骸；(2)血清中杂蛋白，可能是反复冻融造成的；(3)配制培养基的水质与容器不合格。可通过离心或过滤等方法去除黑点；(4)若在培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可予以消除。

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